RFLP 개념 #

제한효소 절편 길이 다형성(영어: Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP)은 분자생물학에서 사용하는 기술로 DNA 서열의 다형성을 알아내는 유전자 표지자이며, 전통적인 유전 변이형 검사방법 중 하나이다. 1980년 Bostein에 의해 처음 발견된 이 분석 방법은 상동 DNA 분자를 같은 제한효소로 처리하면 결과가 다르게 나올 수도 있다. 그 이유는 한 대립인자의 제한 효소 자리에는 염기가 정상이어서 잘릴 수 있지만, 다른 대립인자는 서열이 바뀌게 되어 잘리지 않게 되기 때문이다. 잘린 DNA 조각은 전기영동, 중합효소 연쇄반응을 통해서 확인할 수 있다. 제한효소 절편 길이 다형성은 유전체 지도의 작성에 중요했을 뿐만 아니라, 질병의 유전자 검사, 친자확인에 사용되는 기술이다. 이 방법은 point mutation이 발생하였을 때, 제한효소 처리를 통해 잘리는 절편의 길이를 가지고 판단하는 방법이다. 실제, 이러한 방법을 통해 사람의 point mutation을 측정해보면 사람마다 다양한 DNA 다형성을 가지고 있음을 알 수 있다.

원리 #

염기서열의 특정 부위에 점 돌연변이(point mutation)가 나타나면서 제한효소로 이 부 위를 절단했을 때 생기는 절편의 길이가 사람마다 다양하게 나타나는 점을 이용한 분석 방법이다. RFLP 방법은 돌연변이 유전자를 추적하는 데 사용될 수 있어서 한 가계 내에서 어떤 구성원이 돌연변이를 지니고 있는지를 알 수 있다. 각 개인으로부터 얻은 DNA를 적당한 제한효소로 자르고 전기영동을 한 후 특정 탐침으로 Southern 혼성화할 때 나타나는 절편 크기의 유전적 다형성을 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)이라고 한다. DNA 서열에 돌연변이가 일어나면 새로운 제한효소 인식서열이 생길 수도 있고, 반대로 기존 제한효소 인식서열이 없어질 수도 있다. 예를 들어 sickle-cell anemia가 있는 사람의 β-globin 유전자는 정상인의 β-globin 유전자에 존재하는 제한효소 Dde I의 절단 부위에 치환 점돌연변이가 일어나 이 제한효소로 절단되지 않기 때문에 이 부위의 좌우에 존재하는 두 절편이 붙어 1개의 커다란 절편을 이룬다. 위의 내용과 같이 RFLP는 특정 부위의 변이에 의해 제한효소가 인지하는 염기서열 사이트가 생성되거나 소실되는지에 따라 절편 길이가 달라지는 점을 주요 원리로 하고 있다. 예를 들어, 제한효소 BglII는 AGATCT를 인지하여 A-G 사이트를 인식하여 절단하게 되고 만약 변이가 발생한다면 해당 부위를 절단하지 못해 다양한 길이의 절편을 가지게 된다. 이는 전기영동을 통해 쉽게 감지할 수 있다.

응용 #

• 유전병을 검사하는 마커로써 활용될 수 있다.
• 사람마다 DNA의 다형성을 가지고 있기때문에, 개개인을 식별하거나 법의학적으로 활용될 수 있다.

참고문헌 #

1. 이종극 (2006), 질병 유전체 분석법

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