Xenopus
Obtaining Embryos
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개요 #
척추동물 양서류 동물 모델인 Xenopus 실험을 하기 위해서는 개구리의 알이 필요하다. 대부분의 발달생물학은 수정부터 성체로 성장하기까지 발달 과정을 확인하고, gene function 및 cell signaling의 연구하는데 관심이 많다. 따라서 실험을 하기 위해 어떻게 알을 받아서 수정을 하는지에 대해 알아보자.
배란유도 #
좋은 상태의 알을 얻으려면 보통 3년 이상 성숙한 개구리가 필요하다. 자연적으로 알을 얻는다면 더할나위 없이 좋겠지만 현실은 쉽지가 않다. 그렇기에 실험하기 8~10시간 전에 hCG 호르몬을 500~800 units으로 dorsal lymph sac 부위에 주사한다.
Testes 준비 #
개구리 알을 얻고 자연 수정을 하면 좋겠지만 이 역시도 쉽지 않다. 따라서 수컷 개구리에게서 testes를 추출하여 MR에 넣고 4도씨의 냉장고에 넣어둔다. 한 마리에 2개의 testes를 추출하는데 보통 일주일이 지나면 정자의 효율이 떨어져 수정이 되지 않으므로 주의한다.
인공수정 #
개구리 알은 처음과 끝에 나오는 것보다 중간에 나오는 알이 최상의 상태라고 생각된다. 암컷 개구리는 상당히 예민해져 있는 상태이며 실수하면 개구리에게서 찐득한 액체가 나와 알이 뭉쳐버리게 되므로 가급적 한번에 알을 모은다. 모은 알은 막으로 둘러싸여 있기 때문에 알이 각각 흩어지도록 풀어준 후 testes를 그 위에 뿌려준다. 그리고 상온에 15~20분이 지나면 수정이 된다. 수정이 된 알들은 migration을 하여 검은 부분이 위로 올라와서 육안으로 확인이 가능하다. 80~100%의 수정율이면 최상의 알이라고 볼 수 있다.
