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Cell sorting #

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소개 #

면역 실험 수행 시 특정 세포를 다른 세포로부터 분류해야 할 때가 자주 있습니다. 특정 마커 또는 분화의 정도를 기준으로 분류가 이루어지며, 가장 대표적인 방식은 형광(fluorescence)을 부착하는 것입니다. 골수로부터 B세포 추출 시, CD19/CD20 마커를 인식해 다른 면역 세포와 분리합니다. 1


예시 #

  1. FACS(Fluorescence-Activated Cell Sorting)
  2. MACS(Magnetic-Activated Cell Sorting)

FACS(Fluorescence-activated Cell Sorting) #

유세포분석(Flow Cytometry)의 한 종류로, 한 번에 두 개 이상의 컨테이너로 세포 혼합물을 분류합니다.

필요 장비 #

  1. Fluidic System
  2. Optics
  3. cell sorting을 포함한 Flow cytometry

1.Fluidic system #

세포의 시각적인 특성을 보다 정확하게 측정하기 위해, 세포들은 균일하게 레이저를 통과합니다. Fluidic system은 세포를 하나하나 정확하게 이동시켜, 세포가 동일한 레이져 광량을 받게 합니다. 세포들은 공중에 매달린 통 속의 튜브를 통해 이동하는데, 분석기 내 관 표면에 더 빠른 속도의 용액이 흐르고 있습니다. 유체역학에 의해 세포들은 관 중심으로 모이고, 정확하게 1µm씩 나열되어 떨어집니다.

2.Optics #

세포가 레이저 빛과 접촉하면 그것의 특성에 따라 다르게 분산됩니다. 형광이 붙어있는 경우, 해당 형광에 맞는 주파수의 빛을 방출합니다. Optics는 그것을 위한 레이저와 필터, 렌즈, 센서 등을 포함합니다.

3. cell sorting을 포함한 Flow cytometry #

각 세포는 한 방울씩 떨어지며 전극 주변을 지나가게됩니다. 전기적 힘에 의해 세포는 분류됩니다. 이러한 cell sorting을 포함한 유체분석 시스템을 Flow cytometry라고 합니다. 분류를 위한 형광, 마커 따위가 포함됩니다. 4


MACS(Magnetic-Activated Cell Sorting) #

자석을 이용한 세포 분류방법이다. 형광과 자석 입자가 붙은 항체를 마커로 사용하여 특정 세포만을 분류하는 방법이다. 추가적인 염색이나 탈부착 단계 없이 직접적인 분석이 가능하다. 5

단계 #

  1. 항체, 항원 또는 표면 마커와 결합하는 효소로 코팅 된 자석 bead을 샘플에 첨가합니다.
  2. 타겟 세포가 자석 bead로 label됩니다.
  3. 샘플이 자기장이 적용되는 관을 통과합니다.
  4. 자석 bead가 부착된 세포들만 자기력에 의해 분리됩니다. 실험의 과정과 목적에 따라 타겟 세포에 자석 bead를 부착 할 수도, 타겟 외 세포에 부착할 수도 있습니다.

Reference #

1 https://www.molecular-machines.com/glossary/cell-sorting

2 https://www.sinobiological.com/category/fcm-facs-facs

3 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7350392/

4 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7350392/

5 B. Schmitz (May 1994) et al., "Magnetic activated cell sorting (MACS) — a new immunomagnetic method for megakaryocytic cell isolation: Comparison of different separation techniques". https://doi.org/10.1111/j.1600-0609.1994.tb00095.x

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