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Gibson assembly #

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  • 최초 작성자
    Hana Song
  • 최근 업데이트
    Hana Song

Structured data

Category
Experiment

Gibson assembly #

Gibson assembly는 원하는 DNA 조각들을 조립할 수 있는 기술로 벡터에 하나 이상의 DNA 조각들을 이어 붙일 수 있다.
J.Craig Venter Institute의 Daniel Gibson이 발명하였으며, 그 이름을 따서 명명되었다.
전형적인 클로닝 방법은 제한효소 사이트를 이용하여 진행하지만 gibson assembly를 활용한 클로닝은 제한효소 사이트 없이도 진행할 수 있어 빠르고 편리하게 클로닝이 가능하다.

방법 #

클로닝을 진행할 플라스미드와 DNA 조각들을 연결시키기 위해 PCR용 프라이머를 디자인하여 함께 넣어준 후, 말단핵산분해효소, DNA 합성효소(DNA polymerase), DNA 연결효소(DNA ligase)를 넣고 반응시켜주면 플라스미드와 DNA 조각들이 서로 연결된다.

각 효소의 역할 #

  • 말단핵산분해효소(T5 exonuclease) : DNA의 5' 말단을 분해/제거하여 DNA 조각들을 서로 연결시키기 위한 상태로 만들어줌.
  • DNA 합성효소(DNA polymerase) : DNA 서열의 빈 공간을 새로운 염기로 채움.
  • DNA 연결효소(DNA ligase) : DNA 조각들을 연결시켜 클로닝 진행

프라이머 제작 시 주의할 점 #

  • DNA 조각들의 각 말단 20~30bp가 포함되도록 하여 전체 40~60bp가 되도록 함.
  • 종종 60bp 이상의 프라이머를 사용해야 하는 경우도 있기 때문에 프라이머가 hair pin 구조를 이루는지도 확인
  • 프라이머가 3'의 5bp는 2개 이상의 G 또는 C가 포함되지 않아야 함.
  • 프라이머의 전체 Tm 값이 50℃보다 높아야 함.

Reference #

0.0.1_20240214_1_v81