Invertase #

자당(Sucrose)을 과당(fructose)과 포도당(Glucose)으로 가수분해하는 효소, β-Fructofuranosidase (EC. 3.2.1.26)이라고도 한다. 반응의 결과로 과당과 포도당의 동량 혼합물인 전화당(Inverted sugar)을 생성한다.

Invertase의 산업적 이용 #

식품 첨가물의 하나로 설탕 단맛의 130%, 뛰어난 수분을 보유하고 있다. 효소제, 안정제로 쓰며 전화당, 사탕 가공에 쓴다. 자당 (Sucrose)보다도 흡수되기 쉽고 자당과는 다른 맛을 가지기 때문에 조미료나 자양제로 각종의 과자류, 식품의 제조에 사용된다.

Invertase의 공인 활성 시험법 #

효소 활성은 효소의 촉매작용에 의해 기질이 생성물로 변화하는 속도로, 산업에 필요한 효소와 생산물의 양을 결정하기 위해 효소 활성에 대한 명확한 기준이 필요하다. 따라서 효소의 활성 시험법은 국내외 공인 활성 시험법으로 지정되어 있다.

국내 활성 시험법 #

[분석원리]

본 역가 시험은 pH 4.5, 온도 20℃에서 30분간 자당의 가수분해에 근거를 두고 있다. 가수분해의 정도는 선광계로 용액의 선광도를 측정한다.

[시험용액의 조제]

최종희석액 10mL를 2dm셀을 사용하여 비선광도를측정할 때, 0～+20이 되도록 시험용액을 조제한다. 고체인 경우는 검체일정량을 유발에 취하여 검체에 5배 이상의 물을 가하여 분쇄시킨다음 이를 일정량의 메스플라스크에 옮겨 물을 가하여 필요한 농도로희석한다. 액체검체는 직접 취하여 물로 희석한다.

[시험조작]

1. 기질용액 100mL를 100～110mL의 플라스크에 옮겨 20±0.1℃의 수욕에 15분간 항온시킨다.
2. 시험용액 10mL를 정확히 취하여 가하고플라스크를 5～6회 거꾸로 하여 섞고 수욕조에서 30분간 정치시킨다.
3. 시험용액에 다량의 불용물이 존재하면 매 10분마다 플라스크 내용물을흔들어 혼합시킨다.
4. 항온이 끝나는 시점에 탄산나트륨(1수화물) 약 2g을가하고 흔들어 녹인다.
5. 이 용액의 pH를 측정하여 액성이 알칼리성이아니면 탄산나트륨을 넣어 알칼리성으로 한다.
6. 이 액 5mL를 취하여100mL 메스플라스크에 넣고, 중성초산납시액 6방울을 가하고 물을가하여 눈금을 맞춘다.
7. 여기에 셀룰로스형 응집제 같은 여과보조제 3g을가하고 왓트만 No.1을 사용하여 여과하고 초류액 3mL는 버린다. 8.여액은 완전히 투명하여야 한다. 시험용액 10mL를 함유하는 물 100mL에 대하여도 효소소화액과 같이 처리하여 공시험을 행한다.
8. 선광계관을 측정용액으로 3회 씻고 용액을 채운다. 이를 선광계에 장치하고0.1℃의 눈금이 있는 10～30℃범위의 온도계를 끼운다.
9. 이를 방치하여20℃의 평형이 이루어지도록 한다.
10. 각 용액에 대하여 5회 측정을 하고측정값을 평균한다. 검체측정값에서 공시험측정값을 빼어 순 검체값으로 한다. 다만, 선광계관은 액층의 길이가 2dm인 것을 사용하여야하며 1dm인 경우에는 선광도값에 이를 보정해 주어야 한다. 아래에 보여준 역가와 비선광도(벤츠키 도수로)에 대한 값으로부터 검량선을 작성한다(※ 주 : 선광도＝°Ventzke × 0.346) 검량선에서 보간법에 의해 시험용액의 역가(A)를 구한다. 시험용액이20℃이상에서 측정된 경우 매 1℃마다 0.004를 역가에서 빼고 20℃이하에서측정된 경우 0.004를 더한다.

역가(units/g) ＝ A × 2 ×(1,000/w)

2 : 희석배수
1,000 : mg을 g으로 환산
W : 시험용액 10mL에 함유된 검체의 양(mg)

역가의 정의 : 1 Invertase unit는 상기시험조건 하에서 적용된 자당77%를 가수분해하는 효소의 양이다.

[시액]

인산염완충액 : 인산일나트륨(NaH2PO4․H2O) 115g을 물에 녹여500mL로 한다. 기질용액 : 자당 100g을 300mL의 물에 녹이고 인산염완충액 20mL를 가하고 물을 가하여 1,000mL로 한다. 중성초산납시액 : 초산납(C4H6PbO4․3H2O) 31g을 물 50mL에 녹이고수산화나트륨시액으로 pH 7.0으로 조절하여 물을 가하여 80mL로한다. 왓트만 No.1 또는 동종의 여지를 사용하여 여과하고 여액은마개를 하여 보존한다.

[보존기준]

냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.

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국외 활성 시험법 #